É utilizado em testes de suscetibilidade antimicrobiana de microrganismos aeróbicos de rápido crescimento pela técnica de difusão em disco. O teste de suscetibilidade é um método que se baseia na difusão através do agar com substâncias antimicrobianas que saturam os discos de papel: o crescimento de microorganismos é demonstrado por um halo de inibição ao redor dodisco e o diâmetro do halo é correlacionado com a Concentração Inibitória Mínima (MIC). *Para testes de suscetibilidade antimicromiana seguindo as diretivas internacionais, é indicado a utilização do Agar Mueller Hinton II.
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